一、急性肾功能衰竭大鼠血循环中晚期糖基化终产物迅速增加（论文文献综述）
马骥[1]（2021）在《盐酸小檗碱外用对糖尿病创面愈合的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:糖尿病慢性难愈性创面修复异常主要表现为新生血管及胶原沉积减少、炎症反应时间延长、氧化应激增强等。盐酸小檗碱（Berberine hydrochloride,BBR）具有降血糖、降血脂、改善胰岛素抵抗及抗炎、抗氧化等药理作用,对糖尿病及其并发症治疗具有一定作用。本研究拟通过动物及细胞实验探讨盐酸小檗碱外用对糖尿病创面愈合的作用及主要机制。方法:1.应用STZ腹腔注射SD大鼠（220g-260g）诱导糖尿病大鼠模型,采用背部全层皮肤切除法制备糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面模型。大鼠随机分为正常对照组（NC组）、空白对照组（DM组）、药物溶剂组（BBRSolvent）、药物低剂量组（LBBR）、药物高剂量组（HBBR）,观察创面愈合一般情况及创面面积的变化。在创面愈合过程的第3,8,12,16天切取创面组织进行分析。采用HE和MASSON染色观察创面形态学的变化。ELISA法检测创面晚期糖基化终末产物（AGEs）的生成和堆积。Western Blotting检测创面RAGE受体和Ⅰ型胶原的表达水平。免疫荧光染色检测创面成纤维细胞增殖和凋亡水平。2.分离提取人真皮来源成纤维细胞（HDFs）并鉴定其Vimentin蛋白表达情况。体外制备糖基化白蛋白（AGEs-HSA）,检测其浓度;细胞实验分为对照组,AGEs-HSA组,HSA组,摸索其对HDFs的作用效果及合适的作用浓度。检测RAGE受体的蛋白表达;进一步检测细胞凋亡相关指标,并检测Caspase家族蛋白以明确AGEs-HSA诱导细胞凋亡的信号通路;检测线粒体凋亡信号通路中相关指标的改变,包括Bax/Bcl-2,线粒体膜电位,细胞色素C等,同时检测细胞内ROS的含量。3.探讨BBR是否可以调控AGEs-HSA对成纤维细胞的作用。细胞分为对照组,AGEs-HSA处理组,HSA处理组,BBR溶剂组、低剂量BBR及高剂量BBR处理组。首先通过细胞增殖实验（CCK-8法）及细胞毒性实验（LDH法）摸索合适的BBR浓度;检测RAGE受体的蛋白水平,并通过TUNEL,流式细胞术等方法检测细胞凋亡水平;进一步检测细胞内ROS水平,并通过ROS激活剂代替BBR的方式探索ROS是否为BBR的作用靶点;检测线粒体凋亡信号通路中相关指标的改变,包括线粒体膜电位,细胞色素C,Caspase-9和Caspase-3的蛋白表达等。结果:1.应用STZ腹腔注射SD大鼠后,糖尿病大鼠血糖明显高于正常大鼠。与NC组相比,DM组大鼠创面愈合延迟（P<0.05）,出现血管生成减少,炎症消散延迟,成纤维细胞及基质沉积减少等特征。BBR可有效促进胶原纤维的增生与成熟,加速创面新生上皮的覆盖。同时,BBR可促进肉芽组织的生长,提高创面愈合率,缩短愈合时间。2.在糖尿病创面愈合的过程中,AGEs处于不断生成和堆积的状态。BBR可抑制糖尿病创面中AGEs的生成和堆积,降低创面中RAGE受体的过度表达。同时,BBR可提高糖尿病创面中Ⅰ型胶原的表达,促进创面细胞外基质的沉积。此外,盐酸小檗碱可提高糖尿病创面中成纤维细胞的增殖能力,降低成纤维细胞的凋亡水平。3.人真皮来源成纤维细胞分离及生长情况良好;150μg/mL以内的AGEs-HSA可以呈剂量依赖性地诱导成纤维细胞凋亡,相同浓度下HSA溶液对成纤维细胞无明显促凋亡作用。AGEs-HSA可以上调RAGE受体蛋白表达水平,增加剪切形式的Caspase-9的表达,进一步实验发现AGEs-HSA可以增加Bax/Bcl-2的比值,引起线粒体膜电位丢失,促进细胞色素C的释放,提示其主要影响线粒体凋亡信号通路。同时,AGEs-HSA可以增加细胞内ROS的水平。4.BBR在75μg/mL浓度以内时,可呈剂量依赖性地拮抗AGEs-HSA的作用,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,降低其细胞毒性。BBR不影响成纤维细胞RAGE受体的表达。BBR可以下调细胞内ROS的水平,提示其可能通过调控ROS发挥拮抗AGEs-HSA的作用。BBR可以调控线粒体凋亡信号通路相关的指标,包括增加线粒体膜电位,减少细胞色素C释放入胞浆,下调Caspase-9和Caspase-3的活化水平。结论:1.盐酸小檗碱外用可有效促进糖尿病大鼠创面的愈合。高浓度的盐酸小檗碱效果更为显着。BBR可抑制糖尿病创面中晚期糖基化终末产物的生成,提高糖尿病创面中成纤维细胞的增殖活性,降低成纤维细胞的凋亡水平。2.AGEs-HSA可以通过结合RAGE受体,激活ROS/细胞色素C/Caspase-9/Caspase-3的线粒体凋亡信号通路,诱导人真皮来源成纤维细胞凋亡,从而影响糖尿病创面的愈合;BBR可以抑制细胞内ROS的生成,阻断AGEs-HSA对线粒体凋亡信号通路的激活,从而逆转AGEs-HSA对成纤维细胞的作用。
徐霜霜[2]（2021）在《复方大黄净化液结肠透析对CKD4-5期（非透析）患者免疫功能的影响》文中进行了进一步梳理目的:观察治疗前后慢性肾脏病（CKD）4-5期（非透析）患者免疫功能指标、肾功能指标及中医证候评分的变化,探讨复方大黄净化液结肠透析对CKD4-5期非透析患者免疫功能的影响。方法:病例收集来源于在广西中医药大学第一附属医院肾病科住院,或门诊就诊的CKD4-5期非透析患者60例。随机分为治疗组和对照组各30例,均酌情给予优质低蛋白饮食、控制血压及血糖、纠正钙磷代谢紊乱等西医基础治疗,治疗组在此基础上加用复方大黄净化液结肠透析治疗,1周6日,1日1次。两组疗程均为4周。至观察结束时治疗组脱落3例,对照组脱落2例,最终完成55例。观察两组完成病例治疗前后T细胞亚群比例（CD3+%、CD4+%、CD8+%和CD4+/CD8+）、血清免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）以及血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、胱抑素C（CysC）、肾小球滤过率（eGFR）等实验室指标、中医证候积分与疗效的变化。结果:1.T细胞亚群:治疗前两组CD3+%、CD4+%、CD8+%以及CD4+/CD8+差异无统计学意义（P>0.05）。治疗组前后CD3+%、CD4+%、CD4/CD8差异具有统计学意义（P<0.05）,CD8+%水平无统计学意义（P>0.05）;对照组前后CD3+%、CD4+%、CD8+%以及CD4+/CD8+比较均无统计学意义（P>0.05）。比较两组治疗后组间T细胞亚群比例,治疗组CD3+%、CD4+%与CD4+/CD8+较对照组比较上升,差异具有统计学意义（P<0.05）;两组治疗后CD8+%水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结果提示在复方大黄净化液治疗组能提高患者CD3+%、CD4+%、CD4+/CD8+,而对CD8+%的影响不明显。2.血清免疫球蛋白:对比治疗前两组IgG、IgM、IgA水平无统计学差异（P>0.05）。治疗组干预后IgG、IgM、IgA较前差异具有统计学意义（P<0.05）;对照组前后IgG、IgM、IgA对比,P值均>0.05,差异无统计学意义。比较两组治疗后组间免疫球蛋白水平,治疗组IgG、IgA较对照组升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,两组治疗后IgM无统计学差异（P>0.05）。3.肾功能指标:两组治疗前Scr、BUN、CysC、eGFR无显着统计学差异（P>0.05）。治疗组组内比较,Scr和CysC较治疗前下降,eGFR较治疗前上升,差异具有统计学意义（P<0.05）,治疗前后BUN无统计学差异（P>0.05）。对照组治疗前后的Scr、BUN、CysC、eGFR均无显着差异（P>0.05）。两组治疗后组间比较,治疗组Scr较对照组下降,eGFR较对照组上升,差异具有统计学意义（P<0.05）,而BUN无统计学差异（P>0.05）。结果提示经过复方大黄净化液结肠透析治疗,患者的肾功能明显改善。4.中医证候积分及疗效:经治疗后两组中医证候积分均较前降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后两组组间相比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。经治疗后治疗组的总有效率80%;对照组的总有效率53.33%,两组治疗后的中医证候疗效比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结果提示两组治疗均能一定程度改善患者症状,而治疗组在改善中医疗效方面明显优于对照组。结论:1.复方大黄净化液结肠透析可明显提高CKD4-5期非透析患者血CD3+%、CD4+%、CD4+/CD8+的比值以及IgG、IgA水平,表明复方大黄净化液中药结肠透析对CKD4-5期患者具有免疫调节作用。2.复方大黄净化液结肠透析可降低CKD4-5期患者Scr和CysC水平,提高患者eGFR,提示复方大黄净化液能一定程度改善患者肾功能。3.复方大黄净化液中药结肠透析可明显改善CKD4-5期患者的中医临床症状从而提高患者生活质量。
郭晓媛[3]（2021）在《滋肾丸干预糖尿病肾病肾小管上皮细胞焦亡作用及机制研究》文中指出[目的]探究滋肾丸（ZiShenWan,ZSW）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）肾小管上皮细胞焦亡的干预作用及机制,通过网络药理学研究分析ZSW治疗DN的靶点及通路,为ZSW治疗DN提供科学依据。[方法]1.动物实验:采取随机对照方法,将雄性6周龄db/db小鼠分为模型组、阳性对照组、ZSW高剂量组、ZSW中剂量组、ZSW低剂量组（n=10）;非糖尿病db/m小鼠为正常对照组（n=10）。适应性喂养2周后,ZSW各剂量组给予ZSW乙醇提取物灌胃（高剂量:6.0g/kg;中剂量:3.0g/kg;低剂量:1.5 g/kg）;阳性对照组给予达格列净灌胃（1.0mg/kg）;模型组和正常对照组同时给予等体积去离子水灌胃。每天灌胃1次,持续12周。每2周检测体重、尾静脉FBG;每4周检测尿液ACR、NAG酶、NGAL和CysC;给药12周后摘眼球取血,称量右肾脏重量,固定或冻存肾组织。血清检测HbA1c、BUN和CRE。肾组织经HE染色、PAS染色、Masson染色后光镜观察组织病理学改变,透射电镜观察超微结构改变,进行病理半定量评分;免疫组化染色观察分析肾小管上皮细胞上皮—间充质转化（EMT）标志物α-SMA和E-cadherin的表达强度;TUNEL染色观察分析肾小管上皮细胞核的损伤水平;Western blot及RT-qPCR分别检测NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1以及焦亡相关炎症因子IL-1β、cleaved IL-1β和IL-18的蛋白及mRNA表达水平。2.细胞实验:正常人近端肾小管上皮细胞（HK-2）进行复苏、传代及培养。通过MTT法检测细胞增殖活力筛选细胞培养条件及药物干预剂量,以高渗葡萄糖（45μmol/L）培养HK-2细胞48 h诱导焦亡及EMT,分为高糖组、ZSW低剂量组、ZWS中剂量组、ZSW高剂量组、阳性对照组。ZSW各剂量组给予ZSW乙醇提取物干预（高剂量:15μg/ml;中剂量:7.5μg/ml;低剂量:3.75μg/ml）;阳性对照组给予达格列净干预（0.1μmol/L）。另设空白组为正常对照、甘露醇组为高渗对照。光镜观察细胞形态改变;Transwell试验检测细胞迁移能力;TUNEL染色评估细胞核的损伤、LDH试验评估细胞膜的损伤、Annexin V/PI双染检测细胞焦亡水平;ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-18水平;Western blot 及 RT-qPCR 分别检测细胞 NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、cleaved IL-1 β、IL-18的蛋白及mRNA表达水平。3.网络药理学:通过检索数据库筛选ZSW的药物活性成分和DN的疾病靶点,获得ZSW治疗DN的作用靶点;应用Cytoscape软件构建ZSW治疗DN的“药物—成分—靶点”网络,应用STRING数据库构建ZSW治疗DN的关键靶点的PPI网络,筛选ZSW治疗DN的核心关键靶点;应用Cytoscape软件和DAVID数据库进行基因功能和通路分析。[结果]1.动物实验:（1）药效学:与正常对照组相比,模型组FBG、HbAlc、BUN、血CRE及尿ACR、NAG酶、NGAL、CysC显着升高（P<0.01）。经ZSW干预后上述指标均显着降低（P<0.01）。（2）肾组织病理学:模型组肾小球出现体积增大、基底膜不均匀增厚、系膜基质增生;肾小管出现上皮细胞空泡变性、炎性细胞浸润;胶原纤维染色面积、基底膜厚度、肾小管损伤指数显着升高（P<0.01）。ZSW不同程度减轻上述病理改变,显着降低病理半定量评分（P<0.01）。（3）肾小管上皮细胞EMT:与正常对照组相比,模型组肾小管上皮细胞α-SMA表达强度、肾组织α-SMA蛋白及mRNA表达显着升高;肾小管上皮细胞E-cadherin表达强度、肾组织E-cadherin蛋白及mRNA表达显着降低（P<0.01）。ZSW显着改变肾小管上皮细胞α-SMA和E-cadherin表达强度,不同程度降低肾组织α-SMA蛋白及mRNA表达、升高肾组织E-cadherin的蛋白及mRNA表达（P<0.05或P<0.01）。（4）肾小管上皮细胞焦亡:与正常对照组相比,模型组肾小管上皮细胞核碎裂增多,TUNEL染色阳性率显着升高,肾组织IL-1β、cleaved IL-1β和IL-18蛋白及mRNA表达显着升高（P<0.01）。ZSW减轻肾小管上皮细胞核碎裂,显着降低细胞TUNEL染色阳性率,显着降低肾组织IL-1β、cleaved IL-1β和IL-18蛋白及mRNA表达（P<0.01）。（5）肾组织NLRP3炎症小体活化:与正常对照组相比,模型组肾组织NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白及mRNA表达显着升高（P<0.01）,ZSW不同程度降低上述指标的蛋白表达（P<0.05或P<0.01）,显着降低NLRP3、ASC mRNA表达（P<0.01）,高剂量ZSW显着降低Caspase-1 mRNA表达（P<0.01）。2.细胞实验:（1）EMT:高糖培养使HK-2细胞形态发生间质细胞样改变,迁移能力显着增强,α-SMA蛋白及mRNA表达显着升高,E-cadherin蛋白及mRNA表达显着降低（P<0.01）;ZSW抑制高糖诱导的HK-2细胞的间质样改变,显着降低细胞迁移能力,显着降低α-SMA蛋白及mRNA表达,不同程度升高E-cadherin蛋白及mRNA表达（P<0.05或P<0.01）。（2）焦亡:高糖培养使HK-2细胞的细胞核及细胞膜损伤加重,焦亡水平升高,IL-1β、IL-18释放增加,IL-1β、cleaved IL-1β和IL-18蛋白及mRNA表达显着升高（P<0.01）;ZSW明显减轻细胞核及细胞膜损伤,显着降低焦亡水平,显着减少IL-1β、IL-18释放以及 IL-1β、cleaved IL-1β 和 IL-18 蛋白及 mRNA 表达（P<0.01）。（3）NLRP3炎症小体活化:高糖培养使HK-2细胞NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白及mRNA表达显着升高（P<0.01）;ZSW不同程度降低上述指标的蛋白及mRNA表达（P<0.05 或 P<0.01）。3.网络药理学:经筛选获得ZSW的56个有效活性成分,与数据库中DN的疾病靶点映射获得166个ZSW治疗DN的靶点,与51个ZSW的有效活性成分共同构建“药物—成分—靶点”网络,通过PPI网络筛选获得154个关键核心靶点,诸多靶点涉及炎症反应相关,主要富集在钙通道复合体、膜区、突触和细胞质等细胞组分;G蛋白偶联受体活性、神经递质结合等分子功能;脂多糖介导的信号通路、氧化还原、突触传递等生物学过程;包含NOD样受体（NLR）信号通路在内的炎症反应、晚期糖基化终末产物、细胞增殖分化、内分泌抵抗、神经组织传导等相关信号通路。[结论]1.ZSW有效降低db/db小鼠血糖,减少尿蛋白,改善肾小管早期损伤指标及肾功能,减轻肾组织病理损伤,抑制肾小管上皮EMT及焦亡,可能是通过抑制NLRP3炎症小体活化实现的。2.ZSW有效抑制高糖诱导的HK-2细胞EMT及焦亡,可能是通过抑制NLRP3炎症小体活化实现的。3.ZSW中的多种有效成分多靶点、多通路治疗DN,干预炎症反应是ZSW治疗DN的重要作用机制。
马倩[4]（2021）在《参芪地黄汤加减方治疗慢性肾衰CKD3-4期脾肾气阴两虚证的临床疗效观察》文中研究表明目的:目前慢性肾衰的发病率不断上升,因现代医学治疗上缺乏理想治疗措施,所以结合传统中医药优势,优化综合性治疗方案具有重要意义,本研究通过观察参芪地黄汤加减方治疗慢性肾衰CKD3-4期脾肾气阴两虚证患者的临床疗效,为临床综合施治提供经验与参考。方法:本研究拟收集2019年11月01日至2020年11月30日就诊于芜湖市中医医院肾内科住院部及门诊的慢性肾衰竭CKD3-4期,证属脾肾气阴两虚证的患者。共筛选患者60例,随机分为参芪地黄加减方组（治疗组）和西医对症治疗组（对照组）,每组30名患者。两组均予西医对症治疗（饮食治疗、降压、控制血糖、纠正电解质紊乱等）,治疗组在此基础上加用参芪地黄汤加减方,两组均治疗12周,疗程结束后,采集所有患者治疗前后中医证候、症状积分及相关实验室数据,进行统计学分析。结果:1.纳入治疗组与对照组病例的一般情况（性别、年龄、病程、CKD分期、原发病）及其各项治疗前数据（中医证候积分、临床积分、实验室指标等）差异无统计学意义（P>0.05）,具可比性。2.临床疗效上进行比较,治疗组的临床有效率为93.3%,对照组临床有效率为56.7%,治疗组临床疗效优于对照组（P<0.05）;中医证候疗效比较,治疗组的证候治疗有效率为96.7%,对照组的证候治疗有效率为50%,治疗组证候疗效优于对照组（P<0.05）。3.中医证候总积分及各症状的积分两组治疗前后比较,差异有统计学意义（P>0.05）,两组均对患者症状有改善作用,治疗组疗效优于对照组（P<0.05）。4.疗程结束后,两组患者的血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白、血浆白蛋白的水平以及肾小球滤过率的损伤情况较治疗前均有好转（P<0.05）。治疗组对患者血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白、血浆白蛋白的水平以及肾小球滤过率的改善作用优于对照组（P<0.05）。结论:1.参芪地黄汤加减方联合西医基础治疗对慢性肾衰竭CKD3-4期脾肾气阴两虚证的患者有良好的治疗效果,相比单一西医对症治疗,在改善患者临床症状等方面疗效更优。2.参芪地黄汤加减方可有效降低慢性肾衰竭CKD3-4期脾肾气阴两虚证患者的血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白的水平,提高患者的血浆白蛋白水平和肾小球滤过率,从而保护患者肾功能、改善患者营养状态。3.参芪地黄汤加减方临床使用具有一定安全性,未见明显不良反应和副作用。4.导师运用参芪地黄汤加减方治疗慢性肾衰CKD3-4期脾肾气阴两虚证,是传统中医经典方剂在临床的创新运用,发挥了中医药治疗慢性肾衰竭的优势。
杜华[5]（2020）在《益肾颗粒调控LncRNA MALAT1/mTOR诱导足细胞自噬改善糖尿病肾病的机制研究》文中研究说明糖尿病肾病（Diabetic kidney disease,DKD 或 Diabetic nephropathy,DN）,是由糖尿病导致的慢性肾脏病,在发达国家,DN已经成为终末期肾病的主要原因。DN发病机制复杂,长链非编码RNA与自噬在发病机制中的作用被越来越多的认识到。因机制的不明确性,目前尚缺乏有效的治疗方案,益肾颗粒（Yishen Granule,YSG）是导师张宁教授治疗DN的经验方,临床已验证其有效性,并成为院内制剂,但是YSG的药理成分和作用机制尚不清楚。所以,本研究以高糖高脂饲料喂养联合STZ腹腔注射构建的DN大鼠模型和糖脂毒诱导的足细胞损伤模型为研究对象,予益肾颗粒进行干预,观察YSG通过LncRNA MALAT1/mTOR信号通路,激活足细胞自噬,减轻病理损伤,延缓DN进展的作用和机制。并且,通过高效液相色谱分析法鉴定YSG的化合物成分。实验一:益肾颗粒成分鉴定目的:通过高效液相色谱分析法鉴定YSG的化学成分,明确YSG发挥作用的物质基础。方法:水提法对益肾颗粒进行预处理,减压浓缩后进行定容,所得滤液过0.45μm的微孔膜,取10ul注入高效液相色谱仪。同时,制备标准品溶液,过0.45μm的微孔膜,取10ul,注入高效液相色谱仪。优化高效液相色谱分析仪检测条件:ODS色谱柱,流动相:乙腈（A）-水（B）梯度洗脱:0-10min 2-10%A,10-20min 10-20%A,20-30min 20-30%A,30-40min 30-60%A,40-50min 60-80%A,50-60min 80-95%A,60-65min 95%A;流速 1ml/min,柱温 30℃,进样量10ul（益肾颗粒/标准品）,分离纯化得到化合物。将益肾颗粒的波峰与标准品波峰,进行比对,比对成功即为益肾颗粒成分。结果:在不同的波长254nm和203nm中,可以分离出比较清晰的波峰,得到益肾颗粒的色谱图。与标准品比对后,在254nm波长时,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮4个成分得到明确。在波长为203nm时,黄芪甲苷、藁本内酯、没食子酸、梓醇4个成分得到明确。结论:通过HPLC法鉴定益肾颗粒中8种成分,分别为黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、藁本内酯、没食子酸、梓醇,为YSG的作用和机制研究奠定物质基础。实验二:益肾颗粒防治HFSD+STZ诱导的糖尿病肾病模型大鼠肾小球硬化的作用。目的:观察YSG对纤连蛋白（FN）、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、足细胞desmin蛋白的影响,探讨YSG防治DN肾小球硬化的作用。方法:采用高脂高糖饲料（high fat/high sucrose diet,HFSD）喂养配合STZ腹腔注射方法构建糖尿病肾病模型。HFSD喂养6周,然后予1%STZ溶液30mg/kg腹腔注射。72h后,3次尾静脉随机血糖≥16.7mmol/L,为糖尿病成模标准,即为本次研究的模型纳入标准。分为模型组、氯沙坦钾组、益肾颗粒低剂量组、益肾颗粒中剂量组、益肾颗粒高剂量组,另设正常组。分别予灌胃干预10周。干预结束后,麻醉杀检。双缩脲法检测24小时尿蛋白定量（24hU-Pro）,酶法检测大鼠空腹血糖（FBG）、血浆白蛋白（ALB）、血肌酐（Scr）、尿素氮（Bun）、胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）等。肾组织进行HE、PAS病理染色,FN、α-SMA免疫组化,desmin免疫荧光,caspase-3免疫印迹。结果:与正常组相比,模型组24hU-Pro、Bun、FBG、CHO、TG均增加（P<0.01或P<0.05）,ALB减少（P<0.01）,益肾颗粒干预后,24hU-Pro、Bun、FBG、CHO、TG均有下降（P<0.01 或P<0.05）,ALB增加（P<0.05）其中益肾颗粒高剂量效果最为明显,效果优于氯沙坦钾组。HE、PAS染色显示:模型组出现肾小球基底膜增厚、系膜基质的增多、肾小管内细胞空泡样变性、内皮细胞损伤;未出现K-W结节、肾小球塌陷、小动脉玻璃样变性等晚期病变;氯沙坦钾组、益肾颗粒组在用药10W后,肾组织均有不同程度的好转。α-SMA、FN免疫组化显示:正常组肾小球、小管及间质α-SMA、FN的阳性表达较少;模型组可见肾小球基底膜区、系膜区、肾小管上皮细胞、间质区等不同程度的阳性信号（棕黄染）;氯沙坦钾、益肾颗粒干预后,阳性信号有不同程度减弱,以益肾颗粒高剂量组效果最为显着（P<0.01）。足细胞desmin免疫荧光、caspase-3免疫印迹结果显示:模型组desmin、caspase-3表达增加,益肾颗粒干预后,desmin、caspase-3表达下调（P<0.05）。结论:YSG可以降低DN模型大鼠的尿蛋白,减轻氮质血症,改善糖脂代谢,并且能够通过调节FN和α-SMA表达减轻病理损伤,最终延缓肾小球硬化进展。并且,益肾颗粒发挥这些作用,可能是通过减轻足细胞细胞骨架损伤,保护足细胞结构,减少凋亡产生的。实验三:益肾颗粒通过LncRNA MALAT1/mTOR信号通路调控自噬改善DN和足细胞损伤的机制研究。目的:观察益肾颗粒对足细胞LncRNAMALAT1和mTOR介导的自噬的影响,以及MALAT1-mTOR之间关系,探讨益肾颗粒作用机制。方法:体内实验部分:实验二中肾组织Atg5免疫组化;qRT-PCR检测MALAT1 表达;WB 检测 LC3、ATG5、SRSF1、p-mTOR、c-MYC 表达。体外实验部分:通过糖脂毒诱导足细胞损伤模型,25mM糖+0.08mM棕榈酸（PA）干预48h为造模条件,予益肾颗粒冻干粉进行干预,以氯沙坦钾为阳性对照。①通过CCK-8法检测足细胞增殖活力;划痕实验评估足细胞迁移能力;FITC鬼笔环肽进行细胞骨架染色;Lyso-tracker Red进行自噬溶酶体染色;Annexin V-FITC/PI流式细胞术进行足细胞凋亡检测;qRT-PCR检测MALAT1表达;WB检测足细胞骨架蛋白desmin、Synaptopodin;自噬相关蛋白ATG5、P62;通路相关蛋白p-mTOR、SRSF1、c-MYC表达。观察益肾颗粒对足细胞骨架、自噬、通路的作用。②加入自噬激活剂雷帕霉素（Rap）、抑制剂（CQ）,WB法检测ATG5、P62表达水平,观察益肾颗粒对自噬的表达变化。在Rap条件下,qRT-PCR检测MALAT1表达,观察mTOR对MALAT1的作用,以及益肾颗粒在其中的作用。③对MALAT1进行siRNA干扰,qRT-PCR检测MALAT1表达,观察益肾颗粒对MALAT1的影响;WB检测p-mTOR、SRSF1、c-MYC表达,观察MALAT1对mTOR的作用,以及益肾颗粒在其中的作用。结果:体内实验部分:与正常组相比,模型组Atg5免疫组化表达减少,YSG干预后,Atg5表达增加。WB结果显示,模型组LC3、ATG5表达下调（P<0.05）,p-mTOR表达上调（P<0.05）,SRSF1、c-MYC 变化不明显;YSG干预后,自噬相关蛋白LC3、ATG5表达增加（P<0.05）,p-mTOR表达下调（P<0.05）。提示YSG激活了自噬。体外实验部分:①益肾颗粒能够增加足细胞增殖活力,促进细胞迁移;与模型组相比,能增加Synaptopodin表达,减少desmin表达,使肌动蛋白束状排列整齐,减少细胞骨架重排。提示益肾颗粒能够增加足细胞活力,保护足细胞骨架。②益肾颗粒组与模型组相比,能够增加Atg5表达,减少P62累积;益肾颗粒+Rap组比Rap组、益肾颗粒+CQ组比CQ组Atg5表达更高（P<0.01）,但P62未见减少。Annexin V-FITC/PI细胞凋亡显示,益肾颗粒干预后,凋亡率较模型组均明显下降,与正常组没有统计学差异（P>0.05）。提示,益肾颗粒能够增加足细胞自噬,增加自噬体形成和自噬溶酶体结合,减少足细胞凋亡。③益肾颗粒干预后,MALAT1表达较模型组增加（P<0.05）,p-mTOR表达下调。沉默MALAT1后,p-mTOR增加,糖脂毒性损伤后,p-mTOR进一步增加（与阴性对照相比,P<0.05）,益肾颗粒干预后,p-mTOR明显下调,与阴性对照相比没有统计学差异（P>0.05）。在糖脂毒条件下,与正常组相比,SRSF1表达减少,益肾颗粒和氯沙坦钾干预后,有表达增加趋势,但没有统计学差异（P>0.05）;siRNA处理后,SRSF1表达增加,益肾颗粒干预后,比模型组表达增加趋势,但没有统计学差异（P>0.05）。c-myc在不同条件下,变化不大。提示,MALAT1与mTOR能够相互影响,呈负相关。YSG可以激活MALAT1/mTOR信号通路,机制可能与SRSF1剪接因子的调控作用关系不大。结论:MALAT1与mTOR能够相互影响,呈负相关。MALAT1的下调可以激活mTOR,进而抑制自噬,增加细胞凋亡。YSG可以通过激活MALAT1/mTOR信号通路,增加自噬（促进自噬体形成和自噬溶酶体结合）,减少足细胞骨架重排,减少细胞凋亡。MALAT1对mTOR的调控作用,可能与SRSF1剪接因子的调控作用关系不大。
浦强[6]（2020）在《基于PKM2调控M1型巨噬细胞活化途径探讨黄葵素对糖尿病肾病模型肾保护作用的机制研究》文中提出糖尿病肾病（Diabetic kidney disease,DKD）是糖尿病最常见也是最严重的微血管并发症之一,严重威胁着人类健康。免疫系统激活、微炎症状态是目前一致认可的糖尿病肾病发病机制,如何克服免疫炎症反应,阻止和延缓DKD的进程,是糖尿病肾病防治领域的重要课题。巨噬细胞是关键的免疫炎症效应细胞。糖尿病环境下,肾脏局部巨噬细胞浸润,并活化为促炎M1型,产生多种炎性细胞因子、趋化因子、促纤维化因子等,改变肾脏局部微环境,引起肾小球损伤、结构重塑、硬化,小管萎缩,间质炎症及纤维化等。巨噬细胞从静息状态至促炎M1型经典活化状态发生了糖代谢重编程（从静止转变为活跃代谢状态）。M1型巨噬细胞主要依靠快速供能的有氧糖酵解途径获取能量及中间介质以发挥促炎效应。M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2,PKM2）是细胞代谢重编程的关键酶,是糖酵解最重要的限速酶。生理状态下,PKM2以高激酶活性的四聚体构象存在于细胞质内,能与其他糖代谢酶,如己糖激酶、丙酮酸脱氢酶激酶等构成复合体驱动三羧酸循环,调节细胞的能量代谢。微环境刺激下,PKM2四聚体解离为低活性的二聚体易位至细胞核,作为转录因子,驱动糖酵解进程。核PKM2是巨噬细胞活化M1的关键决定因素。因此,在糖尿病状态下,基于免疫代谢酶点深入研究巨噬细胞相关的肾损伤机制,以筛选出防治DKD新的作用靶点,具有重要的理论及临床意义。中医药在延缓糖尿病肾病病情进展方面具有不可替代的优势。中药黄蜀葵花及其制剂目前已成为治疗糖尿病肾病、慢性肾炎等慢性肾脏病的重要药物。本研究以db/db小鼠及RAW264.7巨噬细胞为研究对象,探讨黄蜀葵花醇提取物-黄葵素对DKD肾脏的保护作用,及其机制是否与巨噬细胞浸润、活化相关,进一步探寻其中可能作用靶点,为黄蜀葵花治疗糖尿病肾病的药理机制提供新的实验依据。目的:从动物和细胞水平,应用分子生物学实验技术,观察黄葵素对db/db小鼠肾组织炎症、纤维化的影响,并初步探明其中机制是否与调控M2型丙酮酸激酶（PKM2）及M1型巨噬细胞浸润、活化相关,为黄蜀葵花治疗糖尿病肾病提供科学依据。方法:1.动物实验:20只雄性db/db小鼠按随机数字表法均分为黄葵素低剂量、中剂量、高剂量治疗组（97.5mg/kg/d,195mg/kg/d,390mg/kg/d）及糖尿病肾病模型组,每组各5只小鼠,空白对照组用5只相同背景的db/m小鼠。黄葵素治疗组分别相应剂量黄葵素混悬液灌胃,对照组及模型组以等体积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。连续给药16周,期间定期检测尿ACR。第24周处死小鼠并收集标本。HE染色和Masson染色观察肾脏形态学改变和肾纤维化程度;免疫组化染色法检测肾组织F4/80标记的巨噬细胞表达情况;蛋白质印迹法检测F4/80蛋白、III型胶原蛋白、波形蛋白、iNOS蛋白和PKM2蛋白表达情况;RT-qPCR法检测TNF-α、IL-1β、iNOS和PKM2基因的mRNA表达情况;ELISA法检测血清TNF-α、MCP-1水平。2.细胞实验:CCK-8法检测不同浓度梯度的黄葵素对RAW264.7巨噬细胞存活率的影响,初步确定适宜浓度黄葵素进行后续药效学实验。不同糖浓度梯度刺激RAW264.7细胞,流式细胞术筛选巨噬细胞M1型活化最佳糖浓度。将RAW264.7巨噬细胞分为低糖组,高糖组,高糖+黄葵素组,流式细胞术分析黄葵素对RAW264.7巨噬细胞M1型活化的影响,蛋白质印迹法检测PKM2蛋白表达,探讨量效关系。结果:1.与对照组db/m小鼠相比:糖尿病肾病模型组db/db小鼠体重明显上升（P<0.01）;肾脏指数下降（P<0.01）;尿ACR水平明显升高（P<0.01）;血肌酐水平明显升高（123.50±17.91 vs 13.40±1.36,P<0.01）,尿素氮水平明显升高（15.22±0.63 vs 6.53±1.38,P<0.01）;肾脏病理损害明显、胶原纤维的沉积;免疫组化提示肾组织中标记F4/80的巨噬细胞浸润增多（P<0.05）;肾组织中巨噬细胞标记F4/80蛋白、M1型巨噬细胞活化标志iNOS蛋白和mRNA、及炎症因子IL-1β、TNF-α基因的mRNA转录均增加（P<0.01）;血清中促炎因子TNF-α、MCP-1水平升高（P<0.01）;肾组织中Collagen Ⅲ蛋白和Vimentin蛋白表达明显上调（P<0.01）;糖代谢重编程关键酶PKM2的蛋白和mRNA表达水平明显上调（P<0.01）。2.与DKD模型组小鼠相比:黄葵素组小鼠尿ACR水平均下降（P<0.05）;黄葵素组小鼠血Scr、血BUN水平总体呈抑制的趋势,其中中剂量组血Scr和高剂量组血BUN水平显着下降（P<0.05）,高剂量组血Scr下降水平更明显（P<0.01）;黄葵素组小鼠肾组织中Collagen Ⅲ蛋白和Vimentin蛋白表达均降低,呈量效关系,中、高剂量治疗组降低更显着（P<0.01）;黄葵素组小鼠F4/80标记的棕染细胞浸润呈不同程度降低,呈一定量效关系,中、高剂量组降低更明显（P<0.05）;黄葵素组小鼠肾组织F4/80蛋白表达均下调,呈量效关系,高剂量组下调最明显（P<0.01）,中剂量组次其次（P<0.05）;黄葵素组小鼠肾组织TNF-α、IL-1β和iNOS基因的mRNA转录均下调（P<0.01）;黄葵素组小鼠血清中TNF-α、MCP-1水平均下调（P<0.05）,高剂量组下调更显着（P<0.01）;黄葵素组小鼠肾组织PKM2的蛋白和mRNA表达均呈不同程度的下调（P<0.05,P<0.01）;但体重与肾脏指数方面,黄葵素组与DKD模型组差异无统计学意义（P>0.05）。3.细胞实验结果:高糖（30mM）刺激RAW264.7巨噬细胞后,PKM2蛋白表达上调（P<0.01）,巨噬细胞M1型活化率上升（P<0.05）;而经过25ug/ml、50ug/ml的黄葵素药液处理后,PKM2蛋白表达下调（P<0.01）,M1型巨噬细胞活化率下降（P<0.05）。结论:1.黄葵素显着降低db/db小鼠蛋白尿水平,减轻db/db小鼠肾脏病理损伤,减少胶原纤维沉积,抑制肾纤维化程度,呈量效关系;2.黄葵素可抑制肾组织局部巨噬细胞浸润及M1型巨噬细胞活化,减轻肾组织炎症及纤维化,呈量效关系;3.黄葵素抑制M1型巨噬细胞活化作用,可能与调控PKM2表达相关。
王丽娟[7]（2020）在《基于网络药理学方法探讨虎杖防治DKD肾保护作用的机制研究》文中指出背景DKD是糖尿病最主要的微血管并发症之一,也是导致ESRD的首要原因。其发病机制复杂,涉及遗传因素、环境因素,与炎症、氧化应激、RAAS系统的激活、纤维化均相关。目前以RAAS阻滞剂为基础的综合治疗可以改善DKD患者的病情,却并不能完全阻止DKD进展至ESRD。因此,开发安全有效的新药物以预防或延迟DKD的启动和进展至关重要。DKD症状属于祖国医学“消渴”“水肿”“关格”“虚劳”等范畴,目前比较公认的DKD中医病名当属“消渴肾病”,其病因与先天禀赋不足、后天饮食不节、脏腑亏损、劳欲伤肾相关。病机为脾肾亏虚,气阴两虚,久则夹痰湿、浊毒、瘀血,而致病势加重、病程缠绵。可归纳为:虚、瘀、浊,虚是基本条件,瘀为核心病机,浊乃最终结局。中药虎杖是治疗糖尿病的传统中草药,如唐朝甄权所着《药性论》所云:虎杖能治大热烦躁,止渴,利小便,压一切热毒。虎杖,性味微苦微寒,有清热解毒、利胆退黄、止咳化痰、散瘀止痛的功效,契合DKD“瘀”之核心病机。同时中医理论认为,清热解毒类中药往往具有比较明显的抗炎作用。许多研究均已证实DKD与高血糖和肾缺氧引起的氧化应激和炎症相关,并且在DKD的进展中,炎症途径最为核心,是导致肾小球硬化进展的重要因素,促炎细胞因子和趋化因子（IL-1β和MCP-1）、C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平与DKD的发生和进展相关。虎杖苷是虎杖的主要有效成分,是白藜芦醇的糖苷形式,两者药理作用相类似,但虎杖苷具有更强的稳定性和抗氧化作用。同时,虎杖苷还是根皮苷的结构类似物,被推测可能同样具有SGLT抑制作用。因此,虎杖苷可能具有新颖的作用机制,可能有一定的肾脏保护作用,降糖保肾双获益,有望成为防治DKD的潜在药物。目的1.采用网络药理学方法和思路,探讨虎杖多组分协同治疗DKD的信号通路及作用机制。2.从细胞实验和动物实验两方面,研究虎杖苷对于SGLT1/2、GLUT1/4活性的抑制作用,以及对STZ诱导的糖尿病大鼠血糖调节和肾脏损伤的影响。方法1.网络药理学利用中药系统药理学数据库（TCMSP）检索并筛选虎杖活性及优效化学成分及潜在作用靶点,通过多个疾病数据库检索糖尿病肾脏病相关靶点,并通过Cytoscape软件分别构建“虎杖活性成分-糖尿病肾脏病”靶点网络图,采用ClueGO分析工具,GO、KEGG基因富集分析虎杖治疗糖尿病肾脏病的作用靶点的生物进程、作用通路等。2.细胞实验,观察虎杖苷对HEK293细胞和3T3-L1脂肪细胞的干预作用及相关指标的检测采用稳定表达SGLT1或SGLT2的人类胚胎肾HEK293细胞作为载体,以14C-AMG为底物来评价体外抑制SGLTs的活性,使用顶部计数微孔板闪烁计数器计算每个孔的放射活性和相应的IC50值,评价不同浓度的虎杖苷的干预作用。采用3T3-L1脂肪细胞,有或没有胰岛素的情况下,不同浓度虎杖苷对于2-脱氧-D-葡萄糖摄入量的影响,使用液体闪烁计数器测量放射性信号,计算2-DG抑制百分比,评价不同浓度虎杖苷GLUT1/4的抑制活性。3.2型糖尿病肾脏病大鼠模型的建立,虎杖苷对DKD模型大鼠的干预及相关指标检测高糖高脂饲养大鼠8周以诱导胰岛素抵抗,然后单次腹膜内注射STZ（35mg/kg bwt）建立DKD大鼠模型,连续2次空腹血糖（FBG）>16.7mmol/L,24小时尿蛋白>20mg为建模成功标准。将大鼠随机分组至代谢笼,分为4组:正常对照组（Normal Control）,DKD模型组（STZ）,阳性对照组（根皮苷）和治疗组（虎杖苷）。各组大鼠分别灌服不同剂量的虎杖苷（20-120mg/kg bwt）、根皮苷（120mg/kg bwt）及对照溶剂（0.25%羧甲基纤维素钠溶液）,连续6周。定期检测大鼠饲料和水的摄入量,检测各组大鼠干预前后血糖、HbA1c、尿素氮、肌酐、24h尿糖、24h尿蛋白,ELISA法测定血清IL-1β,TNF-α,MCP-1和CRP的水平,并探讨时效与量效关系。取1/2左侧肾组织,组织切片予H&E染色,光学显微镜下观察其病理结构的形态学改变。结果1.网络药理学通过OB、DL筛选及文献检索补充,获得虎杖15种优效活性成分,并预测了290个潜在作用靶点。通过韦恩分析得到37个治疗糖尿病肾脏病的作用靶点,并进一步筛选出17个关键靶点。利用ClueGO富集分析治疗靶点被富集在糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、粘附连接、HIF-1信号通路、胰岛素抵抗、VEGF信号通路等47条显着通路和活性氧代谢过程、小分子代谢过程的正调控、血管系统发育的正调控、活性氧生物合成过程等87个显着生物过程。2.体外细胞实验虎杖苷体外抑制SGLT1、SGLT2活性评估,选取根皮苷作为阳性对照药。研究结果表明,虎杖苷对SGLT1、SGLT2均有明显抑制作用,IC50分别为1968nM和878.5nM,与根皮苷组相比,虎杖苷具有中等程度的SGLT2抑制活性,表明虎杖苷可能是潜在的SGLT1/2双重抑制剂。虎杖苷对GLUT1、GLUT4的表达作用评估,以细胞松弛素B作为对照组。研究结果显示,在存在胰岛素的情况下,1μM虎杖苷仅轻微抑制2-DG的摄取,而10μM、100μM虎杖苷对2-DG摄取分别产生32%、78%的抑制,说明虎杖苷呈剂量依赖性抑制GLUT4的活性;另一方面,在存在胰岛素的情况下,细胞松弛素B对GLUT4的活性抑制显着增加了 96%。但是,如果没有胰岛素,虎杖苷对GLUT1的抑制同样呈剂量依赖性,但是10μM虎杖苷对对2-DG摄取仅产生27%的抑制作用,10μM细胞松弛素B对GLUT1的活性抑制增加到90%。说明虎杖苷可能作为潜在的SGLT1/SGLT2双重抑制剂,对GLUT1和GLUT4具有高选择性。3.在体动物实验本研究时效与量效关系研究显示,虎杖苷显着且剂量依赖性降低糖尿病大鼠的血糖、促进尿液葡萄糖的排泄,虎杖苷在120mg/kg bwt的剂量产生最佳的降血糖作用。长期药理作用研究表明,虎杖苷在整个治疗过程中均显示持续的降血糖作用,可显着降低DKD模型组大鼠的HbA1c。虎杖苷治疗可减轻DKD大鼠尿蛋白、血清肌酐和尿素氮等肾功能指标,改善多尿,多饮和多食等症状。DKD模型组大鼠血清炎症因子IL-1β,TNF-α,MCP-1和CRP水平显着升高,虎杖苷治疗后,可明显降低DKD大鼠上述炎症因子水平。同时,本实验肾脏组织病理学检查结果表明,相对于正常对照组,DKD模型组大鼠的肾小管和肾小球结构明显恶化,伴有大量炎性细胞浸润。但虎杖苷治疗后,肾组织细胞排列规则,肾小球和肾小管结构相对完整,炎性细胞明显减少。结论1.虎杖主要活性成分可调控糖尿病肾脏病发病重要通路中的多个靶点。2.虎杖苷体外对SGLT1/2、GLUT1/4均有明显抑制作用,具有中等程度的SGLT2抑制活性,虎杖苷可能是潜在的SGLT1/2双重抑制剂。3.虎杖苷体内显着且剂量依赖性降低糖尿病大鼠的血糖、促进尿糖排泄,降低HbA1c、尿蛋白、血清肌酐、尿素氮及炎症因子IL-1β,TNF-α,MCP-1和CRP的水平。表明虎杖苷可能是新型的SGLT1/SGLT2双靶点抑制剂,具有一定的肾脏保护作用,其肾保护机制可能通过降糖、抗炎、抗氧化等多种途径。
孟妍[8]（2019）在《黄精联合抗性淀粉对早期糖尿病肾病的影响及其临床研究》文中指出目的:通过动物实验观察黄精和抗性淀粉（RS）对早期糖尿病肾病（DN）的影响,探讨其可能的作用机制;研究高RS黄精饼干的最佳配方及制备工艺,并通过人群试验研究,观察其对早期DN患者的饮食干预效果。方法:1.构建DN大鼠模型,观察RS,黄精以及联合作用对早期DN大鼠的作用影响。2.通过单因素试验和正交试验,确定制作高RS黄精饼干的最佳配方及制备工艺。3.单中心临床试验探讨高RS黄精饼干对早期DN患者的临床功效。结果:1.动物实验:实验4周后,除联合低剂量组外,其他各干预组空腹血糖（FBG）均降低,而总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平在黄精组、RS组以及联合作用组也呈降低趋势。黄精联合RS组的糖化血清蛋白（GSP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）水平相比模型对照组显着下降（P<0.05）。2.高RS黄精饼干最佳配方及制备工艺为:以低筋粉100%作基准,其它添加量为RS28%,花生油40%,木糖醇18%,泡打粉3.5%,黄精24%,鸡蛋10%,水30%,烘烤温度面火170℃,底火150℃,烘焙时间20-25min。3.人群试验:干预后,两组患者的腰围、臀围、FBG、糖化血红蛋白（Hb Alc）均有所下降,实验组高RS黄精饼干组的Hb A1c显着降低（P<0.05）。尿微量白蛋白（m ALB）、白蛋白肌酐比值（ACR）、丙二醛（MDA）均呈上升趋势,且实验组增加幅度小于低蛋白饼干对照组;尿β2微球蛋白实验组呈下降趋势;两组超氧化物歧化酶（SOD）水平明显上升（P<0.05）;实验组TNF-α、白细胞介素-6（IL-6）、CRP均下降,其中IL-6显着降低（P<0.05）;实验组患者诸多中医症状有明显改善,有效率显着高于对照组（P<0.05）。结论:1.黄精联合RS可显着降低早期DN大鼠的GSP、TNF-α、CRP水平,提示在控制血糖、降低炎症反应有明显功效。QRT-PCR和Western blot结果未发现黄精和RS可以明显改善早期DN大鼠肾脏细胞外基质（ECM）m RNA及相关蛋白的表达水平,可能与干预时间较短有关。2.通过配方及工艺优化,制作出一款具有低热量、低蛋白、低GI、高RS的营养饼干。3.高RS黄精饼干可显着降低早期DN患者Hb A1c、IL-6水平,提高血清T-SOD水平。同时可改善中医症状,延缓尿微量白蛋白的增加,可能与减轻炎症反应、降低氧化应激有关。
郑艳[9]（2019）在《肾衰方及其拆方对慢性肾衰竭模型大鼠微炎症状态影响的实验研究》文中研究指明目的:通过观察本院肾内科经验方肾衰方及其拆方对慢性肾衰竭（CRF）模型大鼠肾脏及肾功能的影响,以证实肾衰方的疗效;同时观察其对CRF模型大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、C反应蛋白（CRP）促炎性细胞因子水平的影响,研究其在控制微炎症状态的疗效差别以反向探析不同中医病理机制在CRF发病过程中占据的地位及对疾病的发展。材料与方法:将75只SD大鼠按照随机原则分成正常组及造模组,造模组按照Yokozawa法采用腺嘌呤灌胃以复制慢性肾衰模型,造模成功后按照随机原则分成正常组,模型组,肾衰方组,补益组,化瘀组,泄浊组及氯沙坦组,各药物干预组予相应药物水溶液,正常组予蒸馏水进行灌胃。连续给药8周后取血检测大鼠血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、血清白蛋白（ALB）、血清谷丙转氨酶（ALT）、TNF-α、IL-6、CRP,测得各项计量资料采用统计学软件SSPS25.0进行统计学分析。结果:1.肾衰方组大鼠Scr水平低于各拆方组、氯沙坦组及模型组（P<0.05）;同时泄浊组Scr水平也低于其余拆方组、氯沙坦组及模型组（P<0.05）;肾衰方组BUN水平低于除正常组外的其余各组（P<0.05）。2.肾衰方组与泄浊组大鼠TNF-α、IL-6、CRP水平低于其余拆方组及氯沙坦组（P<0.05）。3.药物治疗后肾衰方组大鼠体重水平高于补益组、化瘀组、泄浊组、氯沙坦组、模型组（P<0.05）。4.肾衰方组与补益组大鼠ALB水平高于化瘀组、泄浊组、氯沙坦组及模型组（P<0.05）。5.与正常组比较,肾衰方组及其拆方组大鼠ALT水平无明显差异（P>0.05）。结论:1.肾衰方与泄浊方可以通过提高GRF,明显改善腺嘌呤对大鼠肾功能损伤,促进毒素排泄,减轻氮质血症;其中肾衰方效果最佳。2.肾衰方及其泄浊方可以通过降低促炎性细胞因子的浓度以减轻CRF大鼠的微炎症状态;CRF的微炎症状态与中医的湿浊证具有一定的相关性。3.肾衰方可以明显缓解慢性肾衰竭模型大鼠体重的减轻,且有效提高CRF模型大鼠血清ALB水平,表明肾衰方对可以改善CRF大鼠营养状态。4.肾衰方及其拆方对CRF大鼠无肝损伤风险。
胡军福[10]（2019）在《健脾益肾、活血泄浊法对CKD4期（脾肾气虚、瘀浊内阻型）患者微炎症状态的影响》文中研究说明目的:探讨健脾益肾、活血泄浊法治疗CKD4期（脾肾气虚、瘀浊内阻型）患者微炎症状态的临床疗效。方法:选取我院门诊及住院病房符合纳入标准的CKD4期（脾肾气虚、瘀浊内阻型）患者60例,并随机分为治疗组与对照组。对照组予常规治疗,治疗组在此基础上加用益肾排毒汤合益肾活血方,两组均连续治疗3个月。观察患者治疗开始及结束时微炎症指标（hs-CRP、IL-6、TNF-α）、肾功能指标（Scr、BUN、eGFR）、Hb、ALB、血脂指标（TG、TC、LDL-C、HDL-C）及中医证候积分的变化,然后据此进行统计学分析和疗效分析。结果:（1）微炎症指标的比较:治疗后,两组患者hs-CRP、IL-6水平均有下降,与治疗前相比结果具有统计学差异（P<0.01或P<0.05）,两组组间比较结果具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。治疗后,两组患者TNF-α水平均有下降,治疗组结果具有统计学意义（P<0.01）,对照组结果无统计学差异（P>0.05）;两组组间比较结果具有统计学意义（P<0.01）。（2）肾功能指标的比较:与治疗前相比,治疗组患者Scr、BUN水平均有下降,结果具有统计学差异（P<0.05）;对照组患者Scr、BUN值比较结果无统计学差异（P>0.05）;两组组间比较结果有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。与治疗前相比,治疗组患者eGFR升高,结果具有统计学意义（P<0.05）;对照组患者eGFR无升高,结果无统计学意义（P>0.05）;治疗后两组组间eGFR值比较具有统计学意义（P<0.05）。（3）血红蛋白和白蛋白的比较:治疗后,两组患者Hb、ALB水平均提高,与治疗前相比均具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）,两组Hb值组间比较结果无统计学意义（P>0.05）,两组ALB水平组间比较结果有统计学意义（P<0.05）。（4）血脂指标的比较:治疗后,两组患者TC、TG、LDL-C水平均降低,结果均具有统计学意义（P<0.01或<0.05）;两组组间比较,TC、TG水平相比具有统计学差异（P<0.05）,LDL-C值相比无统计学差异（P>0.05）。治疗后,治疗组患者HDL-C水平明显升高,结果具有统计学差异（P<0.01）;对照组HDL-C水平无显着升高,结果无统计学差异（P>0.05）;两组HDL-C水平对比具有统计学差异。（5）中医证候积分的比较:治疗后,两组患者中医证候积分均有降低,结果均具有统计学意义（P<0.05）;两组组间比较,治疗组的中医证候积分比对照组降低更明显,结果具有统计学意义（P<0.05）。（6）中医证候疗效的比较:治疗后,治疗组的中医证候疗效率为82.6%,对照组中医症候疗效率为66.67%,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）健脾益肾、活血泄浊法可有效降低CKD4期（脾肾气虚、瘀浊内阻型）患者血清hs-CRP、IL-6、TNF-α水平,改善微炎症状态。（2）健脾益肾、活血泄浊法可改善CKD4期（脾肾气虚、瘀浊内阻型）患者肾功能、血脂、贫血及营养指标,减轻慢性肾脏病并发症,从而延缓CKD进展。（3）健脾益肾、活血泄浊法可有效改善CKD4期（脾肾气虚、瘀浊内阻型）患者临床症状,提高治疗有效率。
二、急性肾功能衰竭大鼠血循环中晚期糖基化终产物迅速增加（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、急性肾功能衰竭大鼠血循环中晚期糖基化终产物迅速增加（论文提纲范文）
（1）盐酸小檗碱外用对糖尿病创面愈合的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1. 创面的修复过程 |
| 1.1 凝血期 |
| 1.2 炎症期 |
| 1.3 增殖期 |
| 1.4 重塑期 |
| 2. 糖尿病创面的修复异常 |
| 2.1 糖尿病创面血管生成减少 |
| 2.2 糖尿病创面炎症消退延迟 |
| 2.3 糖尿病创面氧化应激增强 |
| 3. 糖尿病创面的治疗现状及盐酸小檗碱的应用 |
| 3.1 盐酸小檗碱对葡萄糖代谢的影响 |
| 3.2 盐酸小檗碱对脂质代谢的影响 |
| 3.3 盐酸小檗碱对胰岛素抵抗的影响 |
| 3.4 盐酸小檗碱对血管内皮细胞的影响 |
| 3.5 盐酸小檗碱对炎症反应的影响 |
| 3.6 盐酸小檗碱对氧化应激的影响 |
| 第二部分 盐酸小檗碱外用对糖尿病大鼠创面愈合的作用 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验结果 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 糖尿病大鼠一般状态的观察 |
| 2.2 各组大鼠的血糖变化 |
| 2.3 各组大鼠的体重变化 |
| 2.4 创面模型制备后各组创面愈合情况的观察 |
| 2.5 各组大鼠创面愈合率的比较 |
| 2.6 各组大鼠创面愈合时间的比较 |
| 2.7 各组大鼠创面组织HE染色 |
| 2.8 各组大鼠创面组织Masson染色 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 盐酸小檗碱外用对糖尿病创面AGEs及成纤维细胞的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠创面AGEs的含量 |
| 2.2 各组大鼠创面胶原及RAGE受体的蛋白表达情况 |
| 2.3 各组大鼠创面中成纤维细胞增殖及凋亡水平的差异 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第四部分 盐酸小檗碱对人成纤维细胞的影响及作用机制 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 AGEs-HSA对糖尿病创面愈合过程中人真皮来源成纤维细胞的影响 |
| 2.2 盐酸小檗碱对AGEs刺激的成纤维细胞的影响及作用机制 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）复方大黄净化液结肠透析对CKD4-5期（非透析）患者免疫功能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.CKD的现代医学研究 |
| 1.1 流行病学 |
| 1.2 CKD的病因、机制及治疗研究概况 |
| 1.3 CKD患者的免疫功能相关研究 |
| 1.3.1 CKD发病及病情进展的相关免疫机制 |
| 1.3.2 CKD患者存在的免疫失调 |
| 1.3.3 CKD免疫缺陷状态对其并发症的影响 |
| 2 从肠治肾的现代理论基础--肠肾轴 |
| 2.1 肠肾轴与CKD |
| 2.2 肠道与CKD免疫调节 |
| 2.3 中药结肠透析通过调整肠道屏障治疗CKD的研究 |
| 3 中医对CKD的认识 |
| 3.1 病因病机 |
| 3.2 辨证论治 |
| 3.3 中医通腑泻浊法治疗CKD |
| 4 中药结肠透析 |
| 4.1 中药结肠透析的概念和方法 |
| 4.2 复方大黄净化液 |
| 4.2.1 组方及配伍特点 |
| 4.2.2 现代药理学研究 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1 研究资料 |
| 1.1 病例选择 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除及终止试验标准 |
| 1.6 脱落标准及脱落病例的处理 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 研究设计 |
| 2.2 分组方法 |
| 2.3 信息采集 |
| 2.4 治疗方案 |
| 2.4.1 一般基础治疗 |
| 2.4.2 复方大黄净化液结肠透析 |
| 2.5 观察指标(疗效标准) |
| 2.6 统计方法 |
| 3.研究结果 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.1.1 两组在性别、年龄方面的基线比较 |
| 3.1.2 两组分期及原发病分布的比较 |
| 3.1.3 两组在治疗前相关指标比较 |
| 3.2 治疗疗效比较 |
| 3.2.1 T细胞亚群 |
| 3.2.2 血清IgG、IgM、IgA |
| 3.2.3 肾功能相关指标 |
| 3.2.4 中医证候积分及疗效评定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 对T淋巴细胞的影响 |
| 4.2 对免疫球蛋白的影响 |
| 4.3 对肾功能相关指标的影响 |
| 4.4 对中医证候积分及疗效的影响 |
| 4.5 安全性分析 |
| 4.6 不足与展望 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 附表1 |
| 附表2 |
| 缩略词表 |
| 综述 中药结肠透析治疗慢性肾脏病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（3）滋肾丸干预糖尿病肾病肾小管上皮细胞焦亡作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 糖尿病肾病炎症机制及中医药干预研究进展 |
| 1 概述 |
| 2 糖尿病肾病炎症反应的主要参与成分 |
| 3 糖尿病肾病炎症反应的主要信号转导通路 |
| 4 糖尿病肾病炎症反应的中医病机与辨证 |
| 5 中医药干预糖尿病肾病炎症反应的作用及机制 |
| 6 中医药防治糖尿病肾病炎症反应的现代研究方法 |
| 参考文献 |
| 综述二 滋肾丸临床应用及相关研究进展 |
| 1 概述 |
| 2 滋肾丸的源流与命名 |
| 3 滋肾丸的方证与方义 |
| 4 滋肾丸的制方与化裁 |
| 5 滋肾丸的名家应用经验 |
| 6 滋肾丸的临床应用研究 |
| 7 滋肾丸的现代研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 滋肾丸干预糖尿病肾病小鼠肾小管上皮细胞焦亡作用研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 滋肾丸干预高糖培养的人近端肾小管上皮细胞焦亡作用研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 滋肾丸治疗糖尿病肾病网络药理学研究 |
| 1 资料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）参芪地黄汤加减方治疗慢性肾衰CKD3-4期脾肾气阴两虚证的临床疗效观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词中英文对照表 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 病例来源 |
| 2.1.2 诊断标准 |
| 2.1.3 纳入标准 |
| 2.1.4 排除标准 |
| 2.1.5 退出标准 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 样本量估算及分组方法 |
| 2.2.2 治疗方法 |
| 2.2.3 观察指标 |
| 2.2.4 疗效判定标准 |
| 2.3 统计数据分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.1.1 两组性别构成比较 |
| 3.1.2 两组年龄构成比较 |
| 3.1.3 两组病程构成比较 |
| 3.1.4 两组CKD分期比较 |
| 3.1.5 两组原发病构成比较 |
| 3.2 观察指标比较 |
| 3.2.1 临床疗效比较 |
| 3.2.2 中医证候疗效比较 |
| 3.2.3 中医症候积分比较 |
| 3.2.4 主要症状积分比较 |
| 3.2.5 次要症状积分比较 |
| 3.2.6 治疗前后Scr、BUN、eGFR的比较 |
| 3.2.7 治疗前后24h尿蛋白定量比较 |
| 3.2.8 治疗前后ALB的比较 |
| 3.3 安全性指标 |
| 4 讨论 |
| 4.1 现代医学对慢性肾衰竭的研究 |
| 4.1.1 病因及发病机制 |
| 4.1.2 流行病学研究 |
| 4.1.3 CKD的防治 |
| 4.2 祖国医学对慢性肾衰的认识 |
| 4.2.1 对病名的认识 |
| 4.2.2 对病因病机的认识 |
| 4.2.3 治则治法 |
| 4.3 导师对慢性肾衰脾肾气阴两虚证的认识 |
| 4.4 观察指标选择及疗效分析 |
| 4.4.1 观察指标的选择 |
| 4.4.2 中医综合疗效分析 |
| 4.4.3 临床综合疗效分析 |
| 4.5 方药来源及药理分析 |
| 4.5.1 方药组成 |
| 4.5.2 方药来源及分析 |
| 4.5.3 现代药理研究 |
| 4.6 课题创新点 |
| 4.7 不足与展望 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 中医药治疗慢性肾衰竭的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（5）益肾颗粒调控LncRNA MALAT1/mTOR诱导足细胞自噬改善糖尿病肾病的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药在糖尿病肾脏病中研究进展 |
| 综述二 长链非编码RNA在糖尿病及并发症中作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一 益肾颗粒有效成分鉴定 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 益肾颗粒防治HFSD+STZ诱导的糖尿病肾病模型大鼠肾小球硬化的作用 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 益肾颗粒通过LncRNA MALAT1/mTOR信号通路调控自噬改善DN和足细胞损伤的机制研究 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附件 |
（6）基于PKM2调控M1型巨噬细胞活化途径探讨黄葵素对糖尿病肾病模型肾保护作用的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 中医学对糖尿病肾病病因病机的认识 |
| 1.1 病因 |
| 1.2 病机 |
| 1.3 黄蜀葵花及其制剂治疗糖尿病肾病的作用机制研究 |
| 1.4 问题与展望 |
| 2. 现代医学基于免疫炎症角度对糖尿病肾病的认识 |
| 2.1 糖尿病肾病与免疫炎症机制 |
| 2.2 免疫细胞 |
| 2.3 免疫细胞受体 |
| 2.4 炎性细胞因子 |
| 2.5 趋化因子 |
| 2.6 粘附分子 |
| 2.7 免疫复合物沉积 |
| 2.8 补体激活 |
| 2.9 问题和展望 |
| 第二部分 动物实验 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 实验耗材 |
| 1.4 实验主要仪器设备 |
| 1.5 实验主要试剂配制 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 给药方案 |
| 2.3 小鼠一般情况观察 |
| 2.4 小鼠血清、尿液和肾脏组织样本采集 |
| 2.5 肾脏组织苏木精-伊红(HE)染色、胶原纤维(Masson)染色 |
| 2.6 小鼠肾组织免疫组化法检测 |
| 2.7 实时荧光定量聚合酶链技术(RT-qPCR)检测 |
| 2.8 蛋白质印迹法(WB)检测 |
| 2.9 酶联免疫吸附法(ELISA)检测 |
| 2.10 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 各组小鼠一般状态的观察 |
| 3.2 各组小鼠体重、肾脏指数的比较 |
| 3.3 各组小鼠尿ACR、血Scr和BUN的比较 |
| 3.4 各组小鼠肾脏病理改变的比较 |
| 3.5 各组小鼠肾脏纤维化指标(Collagen Ⅲ、Vimentin)蛋白表达的比较 |
| 3.6 各组小鼠炎症因子表达结果的比较 |
| 3.7 各组小鼠肾组织M1型巨噬细胞活化结果的比较 |
| 3.8 各组小鼠肾脏组织PKM2蛋白和mRNA的表达比较 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 细胞实验 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验细胞株 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 实验耗材 |
| 1.4 实验主要仪器设备 |
| 1.5 实验主要试剂配制 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 细胞培养、复苏、传代及冻存 |
| 2.2 Cell Counting Kit (CCK)-8实验 |
| 2.3 流式细胞术 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 不同剂量黄葵素(TFA)对RAW264.7细胞的存活率影响 |
| 3.2 不同糖浓度刺激RAW264.7细胞,筛选巨噬细胞M1型活化最佳糖浓度 |
| 3.3 黄葵素对RAW264.7巨噬细胞活化为M1型状态的影响 |
| 3.4 黄葵素对RAW264.7巨噬细胞活化为M1型下PKM2蛋白的影响 |
| 4. 小结 |
| 第四部分 讨论 |
| 结论 |
| 1. 研究的主要成果 |
| 2. 研究存在的不足和展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（7）基于网络药理学方法探讨虎杖防治DKD肾保护作用的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词 |
| 第一部分 前言 |
| 第二部分 文献研究 |
| 一、中医对糖尿病肾脏病的认识 |
| 1. 对DKD中医病名的认识 |
| 2. 对DKD病因病机的认识 |
| 3. 中医药治疗DKD的现状和进展 |
| 二、中药虎杖及其提取物虎杖苷发挥肾保护作用机制研究进展 |
| 1. DKD的定义及流行病学研究 |
| 2. DKD治疗中的困境和争议 |
| 3. DKD治疗中现有药物的综合探索及未来方向 |
| 4. 虎杖及其提取物虎杖苷概述 |
| 5. 虎杖及其提取物虎杖苷发挥肾脏保护效应的机制研究 |
| 第三部分 基于网络药理学的虎杖防治DKD活性成分靶点探究 |
| 一、概述 |
| 二、资料与方法 |
| 1. 虎杖所含主要化学成分的收集和筛选 |
| 2. 化学成分潜在靶点收集 |
| 3. 糖尿病肾脏病疾病靶点预测 |
| 4. 虎杖化学成分作用靶点与糖尿病肾脏病靶点集韦恩分析 |
| 5. 生物分子网络建立及富集分析 |
| 三、结果 |
| 1. 虎杖中候选化学活性成分的收集和筛选 |
| 2. 化学成分潜在靶点收集 |
| 3. 糖尿病肾脏病相关靶点的搜集 |
| 4. 虎杖活性成分作用靶点与糖尿病肾脏病疾病靶点交集 |
| 5. 生物分子网络建立及富集分析 |
| 四、讨论 |
| 五、结语 |
| 第四部分 虎杖苷对于SGLT1/2、GLUT1/4活性的影响 |
| 一、仪器设备及耗材 |
| 二、实验方法 |
| 1. 细胞培养 |
| 2. 细胞分组 |
| 3. SGLT1和SGLT2体外抑制活性评估 |
| 4. 3T3-L1脂肪细胞2-脱氧-D-葡萄糖摄入量的评估 |
| 5. 统计学处理 |
| 三、实验结果 |
| 1. 虎杖苷对SGLT1和SGLT2的抑制活性 |
| 2. 虎杖苷对GLUT1和GLUT4的表达影响 |
| 四、小结 |
| 五、讨论 |
| 第五部分 虎杖苷对糖尿病大鼠血糖调节和肾脏损伤的影响 |
| 一、实验材料 |
| 1. 仪器设备及耗材 |
| 2. 药物及试剂 |
| 3. 抗体及试剂盒 |
| 二、实验方法 |
| 1. 糖尿病肾脏病动物模型的建立 |
| 2. 实验动物分组 |
| 3. 虎杖苷、根皮苷给药量 |
| 4. 大鼠一般情况观察及指标检测 |
| 5. 肾组织学观察 |
| 6. 统计学处理 |
| 三、实验结果 |
| 1. 一般情况观察 |
| 2. 虎杖苷对糖尿病大鼠血糖水平及24h尿糖的影响 |
| 3. 虎杖苷对血糖、HbA1c、24h尿糖、饲料及饮水摄入量的影响 |
| 4. 虎杖苷对炎症反应的影响 |
| 5. 虎杖苷对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏组织及肾功能的影响 |
| 四、小结 |
| 五、讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 博士期间发表论文 |
| 承担课题 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
（8）黄精联合抗性淀粉对早期糖尿病肾病的影响及其临床研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一章 黄精和RS对早期糖尿病肾病大鼠的影响及作用机制研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 2.研究方法 |
| 2.1 动物模型建立 |
| 2.2 实验动物分组及给药方法 |
| 2.3 标本收集 |
| 2.4 实验指标检测 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 动物基本情况 |
| 3.2 黄精和RS对早期DN大鼠体重的影响 |
| 3.3 黄精和RS对早期DN大鼠脏器重量、脏器系数的影响 |
| 3.4 黄精和RS对早期DN大鼠空腹血糖的影响 |
| 3.5 黄精和RS对早期DN大鼠糖化血清蛋白的影响 |
| 3.6 黄精和RS对早期DN大鼠血脂的影响 |
| 3.7 黄精和RS对早期DN大鼠肾功能指标的影响 |
| 3.8 黄精和RS对早期DN大鼠炎性因子指标的影响 |
| 3.9 大鼠肾脏切片病理组织学变化 |
| 3.10 黄精和RS对早期DN大鼠肾脏ECM mRNA表达水平的影响 |
| 3.11 黄精和RS对早期DN大鼠肾脏ECM相关蛋白表达水平的影响 |
| 4.小结 |
| 第二章 高RS黄精饼干配方及制备工艺研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验原料 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 2.研究方法 |
| 2.1 高RS黄精饼干制作流程 |
| 2.2 高RS黄精饼干品质分析 |
| 2.3 高RS黄精饼干配方优化试验 |
| 2.4 高RS黄精饼干营养组分测定 |
| 2.5 高RS黄精饼干RS含量检测 |
| 2.6 高RS黄精饼干淀粉消化性能测定 |
| 2.7 数据处理及分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 高RS黄精饼干配方优化单因素试验结果 |
| 3.2 高RS黄精饼干配方优化正交试验结果 |
| 3.3 高RS黄精饼干配方优化验证试验结果 |
| 3.4 高RS黄精饼干营养组分 |
| 3.5 高RS黄精饼干中RS含量 |
| 3.6 高RS黄精饼干淀粉消化性能 |
| 4.小结 |
| 第三章 高RS黄精饼干对早期糖尿病肾病患者的干预研究 |
| 1.研究对象 |
| 1.1 病例来源及样本量 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 病例纳入、排除及脱落标准 |
| 1.4 纳入病例 |
| 2.实验材料 |
| 2.1 主要实验试剂 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 3.研究方法 |
| 3.1 试验分组 |
| 3.2 干预方案 |
| 3.3 观测指标 |
| 3.4 疗效判定标准 |
| 3.5 质量控制 |
| 3.6 统计学分析 |
| 4.试验结果 |
| 4.1 研究对象基本信息 |
| 4.2 高RS黄精饼干对人体测量指标的影响 |
| 4.3 高RS黄精饼干对早期DN患者血糖的影响 |
| 4.4 高RS黄精饼干对早期DN患者血脂的影响 |
| 4.5 高RS黄精饼干对早期DN患者肾功能指标的影响 |
| 4.6 高RS黄精饼干对早期DN患者蛋白指标的影响 |
| 4.7 高RS黄精饼干对早期DN患者氧化应激水平的影响 |
| 4.8 高RS黄精饼干对早期DN患者炎性因子的影响 |
| 4.9 高RS黄精饼干对中医证候的影响 |
| 4.10 中医证候疗效 |
| 5.小结 |
| 第四章 讨论 |
| 1.糖尿病肾病的中医研究进展 |
| 1.1 糖尿病肾病病名 |
| 1.2 糖尿病肾病病因病机 |
| 1.3 糖尿病肾病的中医疗法 |
| 2.糖尿病肾病的西医研究进展 |
| 2.1 糖尿病肾病的发病及分期 |
| 2.2 糖尿病肾病的病理机制 |
| 2.3 糖尿病肾病的西医治疗 |
| 3.黄精治疗糖尿病及糖尿病肾病的研究进展 |
| 3.1 黄精植物考证 |
| 3.2 黄精的化学成分及实验研究 |
| 3.3 黄精的功效及应用 |
| 4.抗性淀粉的研究进展 |
| 4.1 RS的起源及发展 |
| 4.2 RS的分类 |
| 4.3 RS的制备方法 |
| 4.4 RS的检测方法 |
| 4.5 RS的生理功能 |
| 4.6 RS的应用 |
| 5.黄精和RS对早期DN大鼠的作用影响 |
| 5.1 DN大鼠模型评价 |
| 5.2 中药治疗DN的药理研究 |
| 5.3 黄精、RS以及联合作用对早期DN大鼠的影响及作用机制探讨 |
| 6.高RS黄精饼干配方及制备工艺 |
| 6.1 高RS黄精饼干加工工艺 |
| 6.2 高RS黄精饼干营养成分 |
| 6.3 高RS黄精饼干淀粉消化性能 |
| 7.高RS黄精饼干对早期DN患者的饮食干预 |
| 7.1 DN的发病及治疗现状 |
| 7.2 高RS黄精饼干的组方依据及分析 |
| 7.3 高RS黄精饼干的疗效评价及作用机制探讨 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 附录3 |
| 附录4 |
| 附录5 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 |
| 论文一 |
| 论文二 |
| 论文三 |
（9）肾衰方及其拆方对慢性肾衰竭模型大鼠微炎症状态影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 肾衰方及其拆方对慢性肾衰竭模型大鼠肾脏形态结构及肾功能的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 肾衰方及其拆方对慢性肾衰竭模型大鼠微炎症状态的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（10）健脾益肾、活血泄浊法对CKD4期（脾肾气虚、瘀浊内阻型）患者微炎症状态的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 临床研究 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 1.6 脱落及终止标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 分组方法 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.3 评价指标 |
| 2.4 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 两组患者治疗前基线资料比较 |
| 3.2 两组患者微炎症指标的比较 |
| 3.3 两组患者肌酐、尿素、肾小球滤过率的比较 |
| 3.4 两组患者血红蛋白、白蛋白的比较 |
| 3.5 两组患者血脂水平的比较 |
| 3.6 两组患者中医证候积分的比较 |
| 3.7 两组患者中医证候疗效的比较 |
| 3.8 安全性指标 |
| 第二部分 讨论与分析 |
| 1 慢性肾脏病微炎症状态的现代医学研究概况 |
| 1.1 慢性肾脏病微炎症状态概念的提出 |
| 1.2 慢性肾脏病微炎症状态的机制 |
| 1.3 慢性肾脏病微炎症状态的临床意义 |
| 1.4 评价慢性肾脏病微炎症状态的常用指标 |
| 1.5 改善慢性肾脏病微炎症状态的常用药物 |
| 2 中医对慢性肾脏病的认识 |
| 2.1 病名与病因病机 |
| 2.2 慢性肾脏病的中医辨证论治 |
| 2.3 中医对慢性肾脏病微炎症状态的认识 |
| 3 健脾益肾、活血泄浊法的确立 |
| 3.1 益肾排毒汤合益肾活血方配伍方义 |
| 3.2 肾排毒汤合益肾活血方单味药药效分析 |
| 4 疗效分析 |
| 5 本研究存在的问题及展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词表 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及攻读学位期间获得的科研成果 |
四、急性肾功能衰竭大鼠血循环中晚期糖基化终产物迅速增加（论文参考文献）
- [1]盐酸小檗碱外用对糖尿病创面愈合的作用及机制研究[D]. 马骥. 南京中医药大学, 2021(01)
- [2]复方大黄净化液结肠透析对CKD4-5期（非透析）患者免疫功能的影响[D]. 徐霜霜. 广西中医药大学, 2021(02)
- [3]滋肾丸干预糖尿病肾病肾小管上皮细胞焦亡作用及机制研究[D]. 郭晓媛. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]参芪地黄汤加减方治疗慢性肾衰CKD3-4期脾肾气阴两虚证的临床疗效观察[D]. 马倩. 安徽中医药大学, 2021(01)
- [5]益肾颗粒调控LncRNA MALAT1/mTOR诱导足细胞自噬改善糖尿病肾病的机制研究[D]. 杜华. 中国中医科学院, 2020(01)
- [6]基于PKM2调控M1型巨噬细胞活化途径探讨黄葵素对糖尿病肾病模型肾保护作用的机制研究[D]. 浦强. 南京中医药大学, 2020(01)
- [7]基于网络药理学方法探讨虎杖防治DKD肾保护作用的机制研究[D]. 王丽娟. 南京中医药大学, 2020(01)
- [8]黄精联合抗性淀粉对早期糖尿病肾病的影响及其临床研究[D]. 孟妍. 山东中医药大学, 2019(05)
- [9]肾衰方及其拆方对慢性肾衰竭模型大鼠微炎症状态影响的实验研究[D]. 郑艳. 辽宁中医药大学, 2019(02)
- [10]健脾益肾、活血泄浊法对CKD4期（脾肾气虚、瘀浊内阻型）患者微炎症状态的影响[D]. 胡军福. 广西中医药大学, 2019(03)